رسالة ماجستير بعنوان (التأثير المناعي والوقائي لجزيئات فوسفات الكالسيوم النانوية مع بكتريا Brucella melitensis المقتولة في الحيوان)

  تم بعون الله تعالى في كلية الطب البيطري بجامعة تكريت وبحضور الاستاذ الدكتور بشار صادق نومي عميد الكلية مناقشة رسالة الماجستير الموسومة (التأثير المناعي والوقائي لجزيئات فوسفات الكالسيوم النانوية مع بكتريا Brucella melitensis المقتولة في الحيوان) للطالبة (هديل صباح محمد) في تخصص (الاحياء المجهرية)، حيث تألفت لجنة المناقشة من كل من:

• أ.د. نهاد عبدالحسين جعفر / تخصص جراثيم / كلية الطب البيطري - جامعة تكريت / رئيسا
• أ.د. محمد علي حمد / تخصص احياء مجهرية بيطرية / كلية الطب البيطري - جامعة الموصل / عضوا
• م.د. مثنى علي سلطان / تخصص علوم طبية حياتية / كلية الطب البيطري - جامعة تكريت / عضوا
• أ.د. بشار صادق نومي / تخصص مناعة وتشخيص بكتريا / كلية الطب البيطري - جامعة تكريت / عضوا ومشرفا
• أ.م.د. اغاريد علي حسين / تخصص مناعة / كلية الطب البيطري - جامعة تكريت / عضوا ومشرفا

 كان ملخص الرسالة كالتالي: تصف هذه الرسالة التحضير والتوصيف الفيزيائي والكيميائي والتقييم في ذكور الجرذان (سلالة ويستار) كنموذج لمستضدات البروسيلا المالطية Brucella melitensis الجديدة المحملة في جزيئات فوسفات الكالسيوم والكيتوسان النانوية (BMAs, CaP/CsNPs)
تعد بكتيريا البروسيلا المالطية B. melitensis ، التي تصيب الماعز والأغنام في المقام الأول، سببًا رئيسيًا للعدوى البشرية، وغالبًا ما تنتقل عن طريق الحليب الملوث. يعد التطعيم، وخاصة ضد B. melitensis Rev 1، أمرًا أساسيًا للسيطرة على داء البروسيلات. ومع ذلك، هناك تداخل وتعقيدا في التشخيص المصلي بسبب التفاعل المتبادل مع الالتهابات الطبيعية. أظهرت جسيمات فوسفات الكالسيوم والكيتوسان (CaP/Cs NPs) النانوية إمكانات واعدة كحاملات للمستضدات في التطعيم. لذلك، فإن تطوير لقاح غير حي فعال ضد بكتيريا البروسيلا المالطية يتم توصيله بواسطة حامل نانوي يعد هدفًا مناسبًا في أبحاث داء البروسيلات.
تم إجراء التغليف النانوي لمستضدات البروسيلا (BMAs) بواسطة جسيمات الكالسيوم الفوسفات / الكيتوسان النانوية (BMAs، CaP / CsNPs). تم فحص التوصيف الفيزيائي والكيميائي لـ BMAs، CaP / CsNPs بواسطة مطيافية الاشعة تحت الحمراء (FTIR)، ومقاييس الطيف الضوئي UV-VIS، وحيود الأشعة السينية XRD ، والمجهر الإلكتروني الماسح (SEM)، والأشعة السينية المشتتة من الطاقة (EDS/EDX)، و تقنيات مجهر القوة الذرية (AFM). تم تحديد السمية الخلوية لـ BMAs، CaP/CsNPs عن طريق قياس الهيموجلوبين المنطلق من كريات الدم الحمراء في الأرانب باستخدام مقياس الطيف الضوئي عند 545 نانومتر بالاضافة الى ذلك تم إجراء جرع التحصين في الجرذان مقسمة إلى خمس مجموعات، حيث تم إعطاء للمجموعتان، G2 وG3، جرعتين من 6 ملغم/مل من BMAs وCaP/CsNPs و2 ملغم/مل من BMAs على التوالي خلال 28 يوم ، بالإضافة إلى ذلك، تم إعطاء جرعة 1 × 105 CFU/ml من B. melitensis Rev 1 للمجموعة G1 في وقت واحد. وعلاوة على ذلك، أجريت المقارنة مع مجموعات السيطرة؛ G4 وG5، الذين أداروا الجسيمات النانوية CaP/Cs وPBS على التوالي. تم سحب عينات الدم على فترتين زمنيتين بعد 14 و 28 يومًا لتقدير الغلوبولين المناعي IgGوالانترلوكين -12 (IL-12) في الدم بواسطة مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)، وكذلك قياس مستوى الغلوبولين المناعي IgM بواسطة اختبار التراص الأنبوبي، وأيضا تم التحري عن قابلية BMAs المحملة في CaP/CsNPs في احداث الاستجابة المناعية في جلد ذكور الجرذان البيضاء (سلالة ويستار) باستخدام ثلاث جرعات (6، 3، و1.5 ملغم/مل) على التوالي من خلال قياس قطر الاحمرار والتثخن في جلد الجرذان. علاوة على ذلك، تم تقدير الحماية بعد 3 أيام من الجرعة الثانية في المجموعة G2 بعد اصابتها بـ 1×106 CFU/ml من بكتريا البروسيلا المالطية
أظهرت النتائج أن BMAs المحملة في CaP/CsNPs لها تحول كيميائي كبير أثناء تصنيع BMAs، Ca، P/Cs النانوية، ولها مظهر كروي ناعم بأقطار (19.43 إلى 4.34) نانومتر مع شكل متجانس. علاوة على ذلك، أظهر تحليل حيود الأشعة السينية XRD هناك تعديل في البنية البلورية، مما يعزز مرونة سلسلة البوليمرللجسيمات النانوية اما بالنسبة لمجهر القوة الذرية AFM فقد كان معدل حجم الجسيمات 30.15 نانومتر وارتفاع إجمالي قدره 107.4 نانومترو كان معدل تحميل 75٪ مما يشير إلى عملية تغليف عالية الكفاءة.
لم يتم تسجيل تحرر للهيموغلوبين من كرات الدم الحمراء الأرانب ولم يلاحظ أي وفيات في الفئران بعد 14 يومًا من الاختبار الحاد. كما أظهرت نتائج تقييم BMAs المحملة في CaP/CsNPs على تحفيز الاستجابات المناعية الخلطية عن اختلافات كبيرة معنوية(P <0.0001) في مستويات IgG (20.54 ± 0.76)، ومعايرة IgM (1280 ± 0)، والإنترلوكين (63.67 ± 4.92) IL-12 بعد الجرعة الثانية مقارنة بالجرعة الأولى . وعلاوة على ذلك، هناك زيادة في السمك والاحمرار بعد 24 ساعه وعن وجود اختلافات معنوية (P <0.0001) عند جرعة 6 ملغم / مل. وعملت الجرعة المعززة على حماية الفئران في المجموعة G2 بشكل فعال من الوفيات بعد إصابتها ببكتريا البروسيلا المالطية
يمكن أن نستنتج أن تحميل مستضدات B. melitensis في CaP/Cs NPs آمن ويساعد تحفيز الاستجابات المناعية الخلطية والخلوية في الجرذان، واظهر قدرة حماية ضد عدوى البروسيلا المالطية ويظهر كمرشح واعدأ محتمل في تطبيقات اللقاحات ضد بكتريا البروسيلا المالطية.

وحضر المناقشة التي اقيمت على قاعة المرحوم د. مهند ماهر في كلية الطب البيطري السادة معاوني العميد للشؤون العلمية والادارية وعدد من اعضاء الكادر التدريسي والوظيفي وجمع من الطلبة بالاضافة الى السيدات والسادة اعضاء اللجنة الوزارية الخاصة بالنظر في استحداث دراسة الدكتوراه في تخصص الاحياء المجهرية في الكلية (انقر هنا للمزيد من التفاصيل حول الموضوع).